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MOC1细胞系

MOC1细胞系

产品时间:2024-06-06

简要描述:

MOC1细胞系产品和服务给予高度赞许,非常感谢广大用户多年来的信任与支持,我们将一如既往的坚持研发高质量产品为本!

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MOC1细胞系

MOC1细胞系

T150烧瓶 : 07-200-64

T75烧瓶 : 10-126-37

: 03-374-059

45um过滤器 : 09-754-21

05% : sh30236.01

25% : sh30042.01

惰性谱线 : MOC1,22

侵略性线 : MOC2

IMDM : sh30228.02 Hams

营养混合物 : F10-F12sh30026.01胎牛血清,特征-海克隆

目录 / 批次号 :  sh30071.03 / AWK24001

过滤1L过滤器瓶的过滤器 :  09-761-108

科学试剂目录编号 :  胰岛素:I6634-50mgH0135-1mg   

EMD微孔试剂目录编号 :  表皮生长因子(EGF),重组人:01-107


细胞系特征

1. 惰性- MOC1:基于体内研究的侵袭性较低。如果从80%合流T150通过1:12,需要2-4天才能达到80%合 流。与更具侵袭性的细胞系相比,MOC1细胞系:在收获时需要的时间更长。

2. 侵袭性- MOC2:基于体内研究,更具侵袭性。如果从80%合流T150通过1:12,需要2-4天才能达到 80%合流。与惰性细胞系相比,惰性细胞系更容易从烧瓶中分离出来。


从T150收集和传递细胞/80%融合

1. 将T150中的介质倒入倾倒瓶中

2. 用10-20ml PBS清洗一次。倒出PBS清洗液。

3. 加入1.5ml 0.05%覆盖整个表面积,从而接触所有细胞(这样做,使细胞不会暴露在),,然后再应用1。

4. 放置在37C培养箱中。侵袭性细胞系孵育3-4分钟,惰性反应可达10-12 min,但在6-8 min后 检查。

5. 故意敲击烧瓶一侧的手掌几次,使细胞松动。

6. 在显微镜下检查,看细胞在培养基中是否能自由漂浮。如果大多数没有,请放回37C培养箱中 再放置3-5分钟。尽量不要让细胞留,因为这样会杀死细胞。

7. 一旦所有或大部分细胞漂浮,加入10ml IMDM MOC线培养基来中和反应。

8. 移液管培养基和细胞从烧瓶中进入15ml的锥形细胞到颗粒细胞。离心机,1000 RPM x 5 min。

9. 倒出上清液。

10. 以1:12的速度通过细胞-在另外12毫升的培养基中重悬细胞。

11. 从其中取出1ml,放入新的T150烧瓶中,总体积为22ml的IMDM MOC系培养基(稀释1:12)

12. 放回37C的培养箱中生长。应在2-4天内达到80%的合流率。


冷冻细胞系

1. 从T150中收集细胞,如下图所示

2. 在15ml锥形管中旋转成颗粒(1000 RPM x5分钟)

3. 排出上清液

4. 点击15ml圆锥形管,重悬细胞

5. 加入1.5ml IMDM MOC系培养基,在培养基中重建细胞-保持冰上

6. 管入冰时缓慢加入1.5 ml冷冻介质(在IMDM MOC线介质中制作冷冻介质-20%DMSO。例:20ml库存-加入16ml IMDM MOC线培养 基和4ml DMSO。注射器过滤器,使用um过滤器

7. 每份1毫升到3个冷冻瓶

8. 在-80摄氏度内储存不超过2周

9. 在1-2周内放入液氮溶液中

注:如果需要,可增加到2ml IMDM和2ml冷冻培养基,以储存在4个小瓶中。此外,在冷冻细胞 前计数细胞并记录在小瓶上。


解冻细胞系

1. 在解冻前,将21ml IMDM MOC线培养基加入到T150中(如果想解冻成T75,则将10ml加入到T75 中)

2. 将液氮从冷冻瓶中取出,喷上含有70%酒精的小瓶进行清洗。

3. 将冷冻瓶的下半部分放在37摄氏度的水浴中(不让盖子接触水,以避免污染),直到 有一小块冰漂浮着。

4. 再次用ETOH喷洒冷冻瓶,然后放在引擎盖上。将1ml培养液移液管加入到1ml细胞中,并将这 些2ml加入到已经含有培养基的T150中(使一个T150总共有22ml)。

5. 在T150烧瓶中取一些培养基,冲洗冷冻瓶,然后平板放置,以确保所有残留的细胞都留在冷 冻瓶中。


注入小鼠侧腹(异位)所需细胞浓度:

MOC1:MOC22:(用0.15ml注射1e6细胞)=6.66e6细胞/ml

MOC2:(用0.15ml注射1e5细胞)=6.66e5细胞/ml

1. 用0获取细胞。如上所述。

2. 用IMDM MOC系培养基,将细胞旋转成50ml锥形的颗粒(1000 RPM x5分钟)。 注:使用50ml锥形,允许小尺寸针抽出细胞供注射。

3. 再次将细胞旋转成小颗粒。倒出PBS上清液(不)。在计算体积的冰PBS中重悬颗粒以达到 适当的浓度,记住灌注上清后50ml锥形中还有 200ul。

4. 将50ml锥形冰转移,每只小鼠皮下注射0.15ml(150ul)细胞。

5. 按照标准协议注入鼠标。我们用1毫升注射器。我们用1.5英寸21号针绘制细胞,并将针切换 到?英寸26号针进行注射。

6. 用10ml冰水PBS重悬细胞颗粒(确保尽可能多地去除含有FCS的介质),再次将细胞旋转成颗 粒(1000 RPM x5分钟)

7. 用3-6 ml冰PBS重悬细胞颗粒再次清洗细胞(体积取决于颗粒的大小,因为你将使用这个体积 来计数细胞)

8. 使用血细胞计数仪或自动细胞计数器计数每毫升的细胞,使用台盼蓝来消除死亡细胞。使用 存在的细胞总数(细胞/mlx总PBS的mlPBS),计算重悬细胞颗粒所需的体积,以达到6.66e6(MOC1,MOC22)或6. 66e5 cell/ml(MOC2)浓度。

例如:MOC1的细胞计数为: 2.8e6细胞/mlx5ml(PBS)=14e6细胞总数。14e6细胞/ 6.66e6细胞/ml=2.1mlPBS将细胞颗粒悬浮在其中。


1L媒体协议

将培养基为2:1 IMDM制成营养混合物

1. 解冻胎牛血清和宾州/链球菌在37摄氏度

2. 1L过滤瓶加入626ml IMDM和313ml营养混合物

3. 添加50毫升FCS

4. 添加10ml Penn流

5. 过滤器

6. 加入1ml5mg/ml胰岛素(或500ul,10mg/ml)

注:用10ml无菌H20稀释胰岛素50mg粉末,加50ul无菌1N盐酸,4C箔保存

7. 加入40ug

注:8. 添加5ug EGF

注:使EGF - make 1ug/ul原液用无血清IMDM稀释,每升加入5ul。在-80处存储等分。

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