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ELISA试剂盒试验前做好对照很首要
发布时间:2019-04-12   点击次数:23次

ELISA试剂盒试验固相载体的选择:很多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。

包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,恳求纯度要好,吸附时通常恳求PH在9.0~9.6之间。
吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,通常多选用4℃ 18~24小时。
有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应留心防护。
其方法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。
如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何种载体,在运用前均可进行选择:用等量抗原包被,在同一试验条件下进行反应,查询其显色反应是不是均一性,据此判明其吸附功能是不是出色。
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证试验作用的性。

ELISA试剂盒试验条件的选择
在ELISA中,进行各项试验条件的选择是很首要的,其间包括:
有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是如今较为满意的供氢体。
底物作用一段时间后,应参与强酸或强碱以中止反应。
通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。
底物运用液有必要新鲜制造,尤其是H2O2在临用前参与。
然后再固定其它条件或采纳“方阵法”(包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度)在正式试验系统里地滴定其工作浓度。
有时本底较高,说明有非特异性反应,可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择恳求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。
蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相一起,查询阳性标本的OD值。
选择OD值大而蛋白量少的浓度。关于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

ELISA试剂盒试验酶符号抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。

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