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关于HPLC的常见问题及解答
发布时间:2019-10-11   点击次数:80次

一、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

答:

1.筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。
2.存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子

二、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?

答:关于漂移问题:
1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定
2.流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡
关于快速变化问题
1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定
2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
3.流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

三、问:HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

答:

1.样品量不足,解决办法为增加样品量 医.学教育网搜集整理
2.样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3.样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4.检测器衰减太多。调整衰减即可。
5.检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
6.检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
7.检测池中有气泡。解决办法为排气。
8.记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
9.流动相流量不合适。调整流速即可。
10.检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。

四、问:做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?

答:原因可能有:
1.泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;
2.比例阀失效,更换比例阀即可;
3.泵密封垫损坏,更换密封垫即可;
4.溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;
5.系统检漏,找出漏点,密封即可;
6.梯度洗脱,这时压力波动是正常的。

五、问:我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高,请问为什么?

 

答:柱压过高是HPLC柱用户zui常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。 医学教|育网搜集整理
1.拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;
2.把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;
3.将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。这时,如果柱压仍不下降,再检查;
4.更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的zui佳选择。 

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