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提取牛血清白蛋白及储存的精妙办法
发布时间:2019-12-03   点击次数:230次

提取办法:

1、盐析    

取小牛血清0.5ml+PBS液0.5ml+饱和硫酸铵2.3ml,充分殽杂匀称,静置20min,2500r/min 离心10min。


2、透析

取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用线扎紧上口(过细要留有清闲),放入有自来水的小烧杯中透析,要不断震动,每隔2min换一次水,换15次。放入试管待用。 


3、准备与电泳

(1)取两条2.5cm x 8.0cm 的膜条,将膜条无光辉面向下,放入作育皿中的巴比妥缓冲液中冲锋渗透。

(2)将充分渗透的两条膜条取出,用干净滤纸吸去多余的缓冲液,以醋纤膜的光辉面距一端1.5cm处作为点样线,并用铅笔在上面编好号①②。

(3)用两个点样器分别在标准液和测定液中櫵一下,点样器下端粘上薄层标准液和样液,然后将点样器竖直,举行点样。

(4)电泳 将点样后的膜条置于电泳槽架上,组织时点样面向下(无光辉面),点样端置于阴极,膜条与滤纸贴紧,待平衡5min后,即可通电。调治电泳仪,使南北极间距的电压为15v/cm,电流0.4~0.6Ma/cm膜条,通电50分钟封闭电源。

(5)通电结束后,用镊子取出膜条,直接浸于盛有氨基10B的染色 液中,染2min取出,立刻浸于漂洗液中,分别在漂洗液中各漂洗5min,直至布景漂净为止。用干滤纸吸干薄膜。

(6)观察两张薄膜的色彩。

储存办法:
    
每10克加100毫升水进行溶解,或用 PBS溶解也可,视用处而决议。然后分装成小支。若不运用防腐剂可储存在零下20或30摄氏度的恒温柜中,若运用防腐剂则可储存在零上4摄氏度的环境下。

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