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细胞培养基的操作过程 你了解吗
发布时间:2021-01-17   点击次数:149次

细胞培养基是人工模拟细胞在体内成长的养分环境,是供应细胞养分和促进细胞成长增殖的物质基础。培育液或培育基的含义简直相同,英文都是medium。当它是粉剂时,倾向性地称为培育基,而将粉剂配成液体后,多称为培育液。培育液中常常补加血清、抗生素等成分。
 过程:
一、复苏
1.把冻存管从液氮中取出来,当即投入37℃水浴锅中,轻微摇晃。液体都融化后(大约1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装10ml培育基的15ml的离心管中(用培育基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉,加1ml培育基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右轻轻摇晃,使培育皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞品种和日期、培育人姓名等,放到CO2培育箱中培育,细胞贴壁后换培育基。
5.3天换一次培育基。

 二、传代
1.培育皿中的细胞覆盖率到达80%-90%时要传代。
2.把原有培育基吸掉。
3.加恰当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培育基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
6.把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液,加1-2ml培育基,把细胞都吹起来。
8.依据细胞品种把细胞传到几个培育皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个,继续培育。
 三、冻存
 把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,中止几分钟,写明细胞品种,冻存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。

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