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上海酶联Elisa试剂盒检验方法
更新时间:2024-06-25   点击次数:141次

Elisa试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用,然而实验新手们面对各种各样、动则上上千种的Elisa试剂盒,内心应该是崩溃的。

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Elisa试剂盒的操作

(一)检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀,置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。

6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7.洗涤,同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)

(二)样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释(2μl血清加入198μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

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