酶联免疫吸附实验（ELISA）是一种广泛应用测定样本中的蛋白、抗体或激素的的免疫分析技术。ELISA将蛋白、抗体、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗体固定在固相载体上，再加入含有待测抗体，形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶标记了，可以直接来检测抗原的量，如没有，则可以用酶标二抗来测定抗原的量。加入酶的底物，底物产生出现的颜色深浅和样本中的抗原呈正比的关系，依此原理计算出样本的抗原总量和浓度。结合ELISA原理，ELISA分为4种方法，每种方法优缺点不同。下面通蔚生物为大家详细介绍一下。

直接法

将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的抗体，即可测定抗原总量。

优势：直接elisa法操作简单，因不需要二抗，避免交叉反应

缺势：实验中一抗需酶标，并不是所有抗体都需要酶标，成本相对较高

间接法

此方法和直接ELISA法区别不是很大，多了酶标二抗，用酶标二抗去辨识一抗来测定抗原的量。

优势：二抗可以加强信号

缺势：交叉反应发生机率较高

双抗体夹心法

被检测的抗原包被在2个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，既捕捉抗体。另一个是检测抗体，此抗体可以用酶标记后直接测定抗原的量；或者不标记，在使用酶标二抗来测定抗原的量。这2种抗体要小心选择，才可避免交叉反应或竞争相同抗原结合部位。

优势：高灵敏、高专一性、抗原无须事先纯化。

缺势：抗原一定要拥有两个以上抗体结合部位

竞争法

样本里的抗原和纯化并固定在固相载体上的抗原一起竞争相同的抗体，当样品中的抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定的抗原就只能结合较少的抗体，

优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。

缺势：整体的敏感性和专一性都较差。

上述是ELISA实验4种较为常见的方法优缺点对比。每种方法对应不同实验需求和样本，才能事半功倍。