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鸡γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

点击次数:358 发布时间:2022/10/26
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鸡γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。


检测范围:

1.5ng/L - 48ng/L


使用目的:

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量。


实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的鸡γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ),再与 HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡γ干扰素(IFN-γ)浓度。


试剂盒组成

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鸡γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因   NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


操作步骤

1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

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2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、1待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同 3。

8.洗涤:操作同 5。

9.显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。

10.终止:每孔加终止液    50μl,终止反应(此时蓝色立转)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。


操作程序总结:


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鸡γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析试剂盒计算

以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。


注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好

控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本  OD值

大于标准品孔孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计

算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。


保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月


 
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