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ELISA免疫测定,您真的掌握透彻了吗?
发布时间:2019-03-07   点击次数:145次

    ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。ELISA免疫测定,您真的掌握透彻了吗?不要着急,接着往下看!

ELISA免疫测定目的是?
1.测定体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等;
2.测定激素,包括小分子量的甾体激素等;
3.测定抗生素和药物;
4.测定病原体抗原,HBsAg、HBeAg等;
5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs等;

ELISA免疫测定原理:
①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;
②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标 抗原(或抗体),而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;
③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或 抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,zui后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例;再加入酶反应底物后,底物被酶催化后变为有色产物,根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析,以了解被测标本中抗体或抗原含量。

ELISA免疫测定步骤:
1.包被;
2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔);
3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟;
5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml;
6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔OD值。

    注意:引起ELISA测定错误结果的原因有标本因素、试剂因素、操作因素。如果您在操作中遇到任何不明白的,不妨来电详询本公司业务员,我们将为您免费安排技术指导服务(代测、培训、委托加工、定制等)。上海恒远生物将与广大科研工作者一起交流科研问题,共同提高,让您成为真正的科研能手。

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