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酶联干货:拿到细胞该如何处理
发布时间:2020-02-27   点击次数:178次

1.收到细胞,di一时间要镜检:调查细胞形态是否正常,关于贴壁细胞则要留意看贴壁状况是否很好,调查细胞密度,有疑议及时咨供给细胞的技术人员。由于运送的时间或许温度的改变,许多贴壁细胞在盛满培育基的瓶子里成长的状况平和时会有点不一样,主要是贴壁结实问题。比如293T,平常贴壁就不是很牢,在装满的培育基瓶子里边,会发生大片的脱落,细胞集合在一起,但是细胞成长还是正常的,经过离心搜集,加以胰酶的消化,从头打散,又能够正常的贴壁成长。
2.当经过上一步的调查,细胞初步没有任何问题时,进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时,则处理如下:弃除瓶中大部分培育基,仅保留5到10mL培育所需的惯例培育基;或更换新鲜的培育基,置于培育箱中,随后每天调查。细胞在低于正常成长温度状况下,会调整为停止期,或许慢速成长期,有必要康复37度的环境至少3个小时左右,才能从头调整到接近对数成长期的状况,在对数成长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率,和细胞的存活率。
3.如果经di一步调查发现细胞密度超越90%,而且细胞状况很好时,则复温后2个小时需求立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。关于成长比较快,状况安稳,不易受外界影响的细胞能够一次多传几瓶;关于成长较慢,细胞比较薄,状况容易动摇的细胞类型,一次少传些,保证每瓶细胞密度大些,便于安稳成长。至于一些比较生疏的细胞,di一次处理也能够按照第二种状况。

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